高效液相色谱仪的各个系统说明

关于高效液相色谱仪有着五大类的系统，相辅相成完成各种功能价值，除此以外还各自有着不同的特点——高效液相色谱仪的主要系统构成及特点，包括输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统等，并且各自有着与众不同之处：

第一．输液系统，

高效液相色谱仪的输液系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。流动相贮存错和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而改变，包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值，或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使各种物质(即使仅有一个基团的差别或是同分异构体)都能获得有效分离。

高压泵的一般压强为l．47～4．4X107Pa，流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度，这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。

第二，就是数据处理系统该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。

第三.分离系统，相对来说分离系统由色谱柱、连接管和恒温器等部分构成，色谱柱一般长度为10～50cm(需要两根连用时，可在二者之间加一连接管)，内径为2～5mm，由"不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，住内装有直径为5～10μm粒度的固定相(由基质和固定液构成)．固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有惰性(如硅胶表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔径可达1000?)和比表面积大的特点，加之其表面经过机械涂渍(与气相色谱中固定相的制备一样)，或者用化学法偶联各种基因(如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等)或配体的有机化合物。因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。

另外，固定相基质粒小，柱床易达到均匀、致密状态，易降低涡流扩散效应。基质粒度小，微孔浅，样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析，基质粒度小，塔板理论数N就越大。这也进一步证明基质粒度小，会提高分辨率的道理。再者，高效液相色谱仪的恒温器可使温度从室温调到60C，通过改善传质速度，缩短分析时间，就可增加层析柱的效率。

第四．进样系统，一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。

第五．检测系统高效液相色谱仪常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种。

     1.紫外检测器主要拥有这样的特点：使用面广(如蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用)；灵敏度高(检测下限为10-10g／ml)；线性范围宽；对温度和流速变化不敏感；可检测梯度溶液洗脱的样品。

　　2.示差折光检测器这一系统通用性强、操作简单，但灵敏度低(检测下限为10-7g／ml)，流动相的变化会引起折光率的变化，因此，它既不适用于痕量分析，也不适用于梯度洗脱样品的检测。

　　3.荧光检测器，凡具有荧光的物质，在一定条件下，其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比。因此，这一检测器只适用于具有荧光的有机化合物(如多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素和某些蛋白质等)的测定，其灵敏度高(检测下限为10-12～10-14g／ml)，痕量分析和梯度洗脱作品的检测均可采用。

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